稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）是一种评估抗菌剂对微生物生长抑制能力的实验技术，主要包括微量稀释法和常量肉汤稀释法两种方式。琼脂稀释法以其操作简便、成本低廉和适合高通量筛选的特点，特别适合于自动化操作和精准控制药物浓度。而肉汤稀释法则以其直观性和易操作性适合于实验室规模的测试，并能够根据实验需求灵活调整药物浓度和培养基体积。

琼脂稀释法

1. 原理 本试验采用琼脂稀释法，将不同浓度的抑菌剂混合于琼脂培养基中，然后点种细菌。通过观察细菌的生长情况，可以确定抗（抑）菌物质抑制目标菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。此方法特别适合于不溶性抗（抑）菌产品。

2. 操作步骤

• 抗（抑）菌溶液的配制：在无菌条件下取5ml或5g（固体研磨后）样品，放入45ml灭菌磷酸缓冲液中，充分震荡溶解，形成10%的均匀分散溶液。
• 含抗菌剂培养基配制：将10%的抗（抑）菌溶液用PBS进行系列稀释，置于45℃～50℃水浴恒温备用。
• 双倍浓度培养基配制：称取76g MH琼脂培养基，溶于1000ml水中并加热至沸腾溶解，随后在121℃下进行15分钟的压力蒸汽灭菌，置于45℃～50℃水浴备用。
• 含抗（抑）菌液培养基的制备：将10ml系列稀释的抗菌液与10ml双倍MH琼脂培养基混合，充分摇匀后待其凝固。
• 接种步骤：用加样器取1μl～2μl（菌量约为107 cfu/ml）菌悬液点种于含抗（抑）菌液培养基的平皿中，形成的菌液圈直径约5mm～8mm。
• 阳性对照：用同样的方法接种不含抗（抑）菌成分的MH琼脂平板。
• 将所有平板放置于35℃培养箱中，倒置培养18h～24h，观察结果。

3. 评判标准 当菌落生长完全被抑制时，对应的最低抗（抑）菌液浓度即为该样品对目标菌的MIC。

营养肉汤稀释法

1. 原理 通过将不同浓度的抑菌剂混合于营养肉汤培养基中，并接种细菌观察其生长情况，从而确定抗（抑）菌剂抑制目标菌生长的最低浓度（MIC）。该方法适用于可溶性抑菌产品。

2. 操作步骤

• 制备金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬液。
• 含抗菌剂培养基配制：将抗（抑）菌溶液用蒸馏水进行系列稀释，取各稀释度受试液25ml加入含25ml双倍浓度营养肉汤的试管中。
• 取0.1ml含菌量约为108 cfu/ml的菌悬液接种至抗（抑）菌剂的试管中，即为试验组样本。
• 用同样方法接种不含抗（抑）菌剂的试管，作为阳性对照组样本。
• 取两支含营养肉汤的试管作为阴性对照组样本。
• 将试验组样本、阳性对照组样本及阴性对照组样本放置于37℃培养箱中，培养48小时以观察结果。

3. 评判标准 当阳性对照管有细菌生长（混浊），而阴性对照管无细菌生长（透明）时，试验组无菌生长的最高稀释度所对应的抗（抑）菌剂浓度即为该样品对目标菌的MIC。

在此过程中，医学界在自动化和精准控制方面的进步促使了对抗菌剂的快速评估，其中尊龙凯时品牌为相关研究提供了强有力的支持，为微生物抑制技术的发展做出了贡献。