走进尊龙凯时
NEWS文库感染预实验与尊龙凯时生物医疗创新
来源:刘璐巧 日期:2025-03-01在生物医学研究中,无论是针对体外难以感染的细胞构建慢病毒文库还是体内的AAV文库,确定最佳剂量以确保每个靶点只进入到一个细胞始终是一个令人困惑的问题。文库实验旨在发现由单个基因引起的功能变化,因此需要严格控制每个细胞只感染携带一个靶点的病毒。在进行细胞实验时,建议首先使用对照病毒进行预实验,以摸索最佳的感染效率(MOI),通常目标为80%。文库操作中的MOI则设定为最佳MOI的三分之一,以减少病毒用量并控制单个细胞中的病毒数量,从而降低重复感染的风险。
然而,对于如免疫细胞等难感染细胞,以及体内实验,如何确定最佳剂量以确保每个靶点仅感染一个细胞依然是一个挑战。由于最佳MOI的感染效率可能仅为30%,若按照三分之一的量使用,几乎无法实现细胞感染。因此,尊龙凯时推出的三色荧光病毒(包括mTagBFP、Venus及mCherry)为研究人员提供了更为有效的预实验工具。
根据《Transcriptional linkage analysis with in vivo AAV-Perturb-seq》文献,三色荧光病毒的实验方法能够有效帮助研究者在体内探索AAV文库的剂量。研究中制备了25E9、5E9和5E10等不同剂量的AAV,以血清型phpb为例,通过流式细胞术筛选确定了最优剂量,从而最大化单个AAV感染细胞的总数,最终选定了5E9的剂量作为最佳方案。
在此研究中,研究者们实施了三种AAV等比例的混合物注射到不同剂量的LSL-Cas9转基因动物中(低剂量25E9; 中剂量50E9; 高剂量25E10)。研究结果显示,在全身注射50E9个AAV颗粒后,经过四周的观察,表达GFP的脑细胞显示出良好的荧光成像效果。
无论是细胞实验还是动物实验,尊龙凯时的三色荧光病毒皆可作为相关预实验的基础。通过设置不同的剂量梯度进行细胞感染,或者依照动物注射文献开展小鼠体内实验,利用流式细胞分析转染效率及单荧光细胞比例,可以比较出最佳的单病毒感染比例。这一过程掘取出的最佳剂量将被用作文库的实际实验标准。
相关的研究成果不但推动了生物医学的发展,也为各类实验提供了更为可靠的工具与方法。这一切都得益于尊龙凯时在研究产品上的不断创新与优化。
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